Home Neuronal Signaling AChR 조절제 PNU-120596

연구용

PNU-120596 AChR 조절제

제품 번호: S2629

PNU-120596 (Nsc 216666)은 216 nM의 EC50을 가진 α7 nAChR의 양성 알로스테릭 조절제입니다.
PNU-120596 AChR 조절제 Chemical Structure

화학 구조

분자량: 311.72

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품질 관리 (Quality Control)

배치: 순도: 99.06%
99.06

화학 정보, 보관 및 안정성 (Chemical Information, Storage & Stability)

분자량 311.72 화학식

C13H14ClN3O4

 보관 (수령일로부터)
CAS 번호 501925-31-1 SDF 다운로드 원액 보관

동의어 Nsc 216666 Smiles CC1=CC(=NO1)NC(=O)NC2=CC(=C(C=C2OC)OC)Cl

용해도 (Solubility)

In vitro
배치:

DMSO : 62 mg/mL (198.89 mM)
(수분으로 오염된 DMSO는 용해도를 감소시킬 수 있습니다. 신선하고 무수 DMSO를 사용하십시오.)

Ethanol : 1 mg/mL

Water : Insoluble

몰농도 계산기

질량 농도 부피 분자량
희석 계산기 분자량 계산기

In vivo
배치:

생체 내 제형 계산기 (투명한 용액)

1단계: 아래 정보 입력 (권장: 실험 중 손실을 고려하여 추가 동물 포함)

mg/kg g μL

2단계: 생체 내 제형 입력 (이것은 계산기일 뿐 제형이 아닙니다. 용해도 섹션에 생체 내 제형이 없는 경우 먼저 당사에 문의하십시오.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

계산 결과:

작업 농도: mg/ml;

DMSO 원액 준비 방법: mg 약물 사전 용해 μL DMSO ( 원액 농도 mg/mL, 농도가 해당 약물 배치의 DMSO 용해도를 초과하는 경우 먼저 당사에 문의하십시오. )

생체 내 제형 준비 방법: 취하다 μL DMSO 원액, 다음 추가μL PEG300, 혼합하고 투명하게 한 다음 추가μL Tween 80, 혼합하고 투명하게 한 다음 추가 μL ddH2O, 혼합하고 투명하게 합니다.

생체 내 제형 준비 방법: 취하다 μL DMSO 원액, 다음 추가 μL 옥수수 기름, 혼합하고 투명하게 합니다.

참고: 1. 다음 용매를 추가하기 전에 액체가 투명한지 확인하십시오.
2. 용매를 순서대로 추가해야 합니다. 다음 용매를 추가하기 전에 이전 추가에서 얻은 용액이 투명한 용액인지 확인해야 합니다. 와동, 초음파 또는 뜨거운 물 중탕과 같은 물리적 방법을 사용하여 용해를 도울 수 있습니다.

작용 메커니즘 (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
α7 nAChR
216 nM(EC50)
시험관 내(In vitro)
PNU-120596 increases agonist (Ach)-evoked calcium flux mediated by an engineered variant of the human α7 nAChR. This compound increases agonists (choline and ACh)-evoked currents mediated by wild-type receptors and also demonstrates a pronounced prolongation of the evoked response in the continued presence of agonist in Xenopus oocytes. It increases the channel mean open time ofα7 nAChRs but has no effect on ion selectivity and relatively little, if any, effect on unitary conductance. When applied to acute hippocampal slices, this chemical increases the frequency of ACh-evoked GABAergic postsynaptic currents measured in pyramidal neurons; this effect is suppressed by TTX, suggesting that it modulates the function of α7 nAChRs located on the somatodendritic membrane of hippocampal interneurons. Besides the positive modulation to α7 nAChR, this compound induces a profound retardation of the kinetics of desensitization, raising the potential of Ca2+-induced toxicity through excessive stimulation of α7 nAChR. It causes changes in cysteine accessibility at the inner beta sheet, transition zone and agonist binding site while binding to α7 nAChR. Binding sites for this chemical are not in the agonist-binding sites and it enhances agonist-evoked gating of nicotinic receptors by eliciting conformational effects that are similar but nonidentical to the gating conformations promoted by Ach.
키나아제 분석
Ca2+ 형광 분석
α7 nAChR(α7*) 변이체를 발현하는 SH-EP1 인간 상피 세포를 10% 태아 소 혈청(fetal bovine serum), L-글루타민, 100 U/ml 페니실린/스트렙토마이신, 250 ng/mL 펀기존(fungizone), 400 μg/mL 하이그로마이신 B 및 800 μg/mL 제네티신이 보충된 비필수 아미노산 함유 최소 필수 배지(MEM)에서 배양한다. α7*은 인간 α7 nAChR의 변이체로, SH-EP1 세포에서 높은 기능적 발현을 가능하게 하는 첫 번째 막관통 도메인 내 두 개의 점 돌연변이(T230P 및 C241S)를 가지고 있다[Groppi VE, Wolfe ML, Berkenpas MB (2003) U.S. Patent 6,693,172 B1]. 세포는 6% CO2가 유지되는 37 °C 인큐베이터에서 배양된다. 세포를 트립신 처리하여 분석 2일 전에 2 × 104 세포/웰의 밀도로 어두운 측벽과 투명한 바닥을 가진 96-웰 플레이트에 접종한다. 세포에는 무수 디메틸설폭사이드와 20% 플루로닉(pluronic) F-127에 녹인 Calcium Green-1 AM 혼합물을 로딩한다. 이 시약을 각 웰의 성장 배지에 직접 첨가하여 2 μM Calcium Green-1 AM의 최종 농도를 맞춘다. 그 후 세포를 37 °C에서 1시간 동안 염색액과 함께 배양한 다음, 다음 성분(mM 단위)으로 구성된 Mark's modified Earle's balanced salt solution(MMEBSS)으로 4회 세척한다: 4 CaCl2, 0.8 MgSO4, 20 NaCl, 5.3 KCl, 5.6 D-글루코스, 20 Tris-HEPES, 120 N-메틸-D-글루카민, pH 7.4. 네 번째 세척 후, 세포를 37 °C에서 최소 10분간 인큐베이션한다. 각 웰의 MMEBSS 최종 부피는 100 μL이며, 1 μM의 최종 농도가 되도록 모든 웰에 아트로핀을 첨가한다. 형광 이미징 플레이트 리더(FLIPR; Molecular Devices, Union City, CA)를 설정하여 500 mW 출력의 488 nm에서 Calcium Green을 여기시키고 >525 nm의 형광 방출을 측정한다. 각 웰을 조사하기 위해 0.5초 노출을 사용한다. 형광은 2.0 또는 1.2로 설정된 F-stop을 사용하여 감지한다. 30초간의 베이스라인 기록 후, 3 × 농도의 스톡 50 μL를 96-웰 플레이트의 각 웰에 첨가하여 시험 화합물을 투여한다. 각 실험에서 4개의 웰은 비히클(0.2% DMSO) 대조군으로 사용된다.
생체 내(In vivo)
Systemic administration of PNU-120596 (1 mg/kg) to rats improves the auditory gating deficit caused by amphetamine, a model proposed to reflect a circuit level disturbance associated with schizophrenia. When administered prior to Carrageenan, 30 mg/kg of this compound significantly blunts mechanical hyperalgesia and weight bearing deficits for up to 4 hours. This chemical attenuates the carrageenan-induced increase in levels of TNF-α and IL-6 within the hindpaw oedema, diclofenac only attenuated IL-6 levels. Established mechanical hyperalgesia induced by Carrageenan or CFA is also partially reversed by this agent.
참조
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22536953/