연구용
ZSTK474 PI3K inhibitor
제품 번호: S1072
화학 구조
분자량: 417.41
품질 관리 (Quality Control)
세포 배양, 처리 및 작업 농도
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)
| 세포주 | 분석 유형 | 농도 | 배양 시간 | 제형 | 활성 설명 | PMID |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Sf21 insect cells | Function assay | 1 h | Inhibition of bovine recombinant PI3K p110delta expressed in Sf21 insect cells using phosphatidylinositol as substrate after 1 hr by phosphoimaging, IC50=0.7 nM | |||
| human HCT116 cells | Function assay | 15 mins | Inhibition of PIK3CA H1047R mutant-mediated cell signaling in human HCT116 cells expressing PTEN assessed as inhibition of insulin-induced pAkt/PKB phosphorylation at Thr308 treated for 15 mins before insulin challenge measured after 5 mins by immunoblotting, IC50=78 nM | |||
| human LNCAP cells | Proliferation assay | 3 days | Antiproliferative activity against human LNCAP cells after 3 days by MTS assay, IC50=0.21 μM | |||
| human NZB5 cells | Proliferation assay | 5 days | Antiproliferative activity against human NZB5 cells expressing wild type p110alpha assessed as incorporation of [3H]thymidine after 5 days, IC50=0.22 μM | |||
| human NZOV9 cells | Proliferation assay | 5 days | Antiproliferative activity against human NZOV9 cells expressing p110alpha kinase Y1021C mutant assessed as incorporation of [3H]thymidine after 5 days, IC50=0.29 μM | |||
| human MDA-MB-468 cells | Cytotoxic assay | 48 h | Cytotoxicity against PTEN-deficient human MDA-MB-468 cells assessed as inhibition of cell growth after 48 hrs by Cell Titer 96 assay | |||
| human A549 cells | Function assay | 10 μM | 1 h | Inhibition of PI3K in human A549 cells assessed as reduction in pAkt level at 10 uM after 1 hr by Western blotting analysis | ||
| human DMS114 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human DMS114 cells | ||||
| human MKN74 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human MKN74 cells | ||||
| human SNB78 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human SNB78 cells | ||||
| human St-4 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human St-4 cells | ||||
| human DU145 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human DU145 cells | ||||
| human LOXIMVI cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human LOXIMVI cells | ||||
| human PC3 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human PC3 cells | ||||
| human LOXIMVI cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human LOXIMVI cells | ||||
| human OVCAR3 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human OVCAR3 cells | ||||
| human SKOV3 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human SKOV3 cells | ||||
| human KM12 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human KM12 cells | ||||
| human HT-29 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human HT-29 cells | ||||
| human HCT15 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human HCT15 cells | ||||
| human NCI-H226 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human NCI-H226 cells | ||||
| human NCI-H522 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human NCI-H522 cells | ||||
| human A549 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human A549 cells | ||||
| human HCC2998 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human HCC2998 cells | ||||
| human SNB75 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human SNB75 cells | ||||
| human OVCAR4 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human OVCAR4 cells | ||||
| human OVCAR5 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human OVCAR5 cells | ||||
| human OVCAR8 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human OVCAR8 cells | ||||
| human SKOV3 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human SKOV3 cells | ||||
| human ACHN cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human ACHN cells | ||||
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화학 정보, 보관 및 안정성 (Chemical Information, Storage & Stability)
| 분자량 | 417.41 | 화학식 | C19H21F2N7O2 |
보관 (수령일로부터) | |
|---|---|---|---|---|---|
| CAS 번호 | 475110-96-4 | SDF 다운로드 | 원액 보관 |
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| 동의어 | N/A | Smiles | C1COCCN1C2=NC(=NC(=N2)N3C4=CC=CC=C4N=C3C(F)F)N5CCOCC5 | ||
용해도 (Solubility)
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In vitro |
DMSO
: 15 mg/mL
(35.93 mM)
Water : Insoluble Ethanol : Insoluble |
몰농도 계산기
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In vivo |
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생체 내 제형 계산기 (투명한 용액)
1단계: 아래 정보 입력 (권장: 실험 중 손실을 고려하여 추가 동물 포함)
2단계: 생체 내 제형 입력 (이것은 계산기일 뿐 제형이 아닙니다. 용해도 섹션에 생체 내 제형이 없는 경우 먼저 당사에 문의하십시오.)
계산 결과:
작업 농도: mg/ml;
DMSO 원액 준비 방법: mg 약물 사전 용해 μL DMSO ( 원액 농도 mg/mL, 농도가 해당 약물 배치의 DMSO 용해도를 초과하는 경우 먼저 당사에 문의하십시오. )
생체 내 제형 준비 방법: 취하다 μL DMSO 원액, 다음 추가μL PEG300, 혼합하고 투명하게 한 다음 추가μL Tween 80, 혼합하고 투명하게 한 다음 추가 μL ddH2O, 혼합하고 투명하게 합니다.
생체 내 제형 준비 방법: 취하다 μL DMSO 원액, 다음 추가 μL 옥수수 기름, 혼합하고 투명하게 합니다.
참고: 1. 다음 용매를 추가하기 전에 액체가 투명한지 확인하십시오.
2. 용매를 순서대로 추가해야 합니다. 다음 용매를 추가하기 전에 이전 추가에서 얻은 용액이 투명한 용액인지 확인해야 합니다. 와동, 초음파 또는 뜨거운 물 중탕과 같은 물리적 방법을 사용하여 용해를 도울 수 있습니다.
작용 메커니즘 (Mechanism of Action)
| 특징 |
First orally administered PI3K inhibitor used in vivo.
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|---|---|
| Targets/IC50/Ki |
PI3Kδ
(Cell-free assay) 4.6 nM
PI3Kα
(Cell-free assay) 16 nM
PI3K
(Cell-free assay) 37 nM
PI3Kβ
(Cell-free assay) 44 nM
PI3Kγ
(Cell-free assay) 49 nM
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| 시험관 내(In vitro) |
1 μM 농도의 ZSTK474는 PI3K 활성을 대조군 수준의 4.7%로 강력하게 감소시키는 반면, LY2194002는 활성을 대조군의 44.6%로만 감소시킵니다. 이 화합물은 재조합 p110β, -γ, 및 -δ의 활성을 각각 17 nM, 53 nM, 6 nM의 IC50으로 억제합니다. 이는 평균 GI50이 0.32 μM인 39개 인간 암세포주 패널에 대해 강력한 항증식 활성을 나타내며, 평균 GI50이 각각 7.4 μM 또는 10 μM인 LY294002나 wortmannin보다 더 효과적입니다. 1 μM 농도의 이 화학적 처리는 쥐 배아 섬유아세포(MEF)에서 혈소판 유래 성장 인자에 의해 유도되는 막 러플링(membrane ruffling) 및 PIP3 생성을 차단합니다. 10 μM 농도에서는 OVCAR3 세포의 세포 사멸을 유도하고, A549 세포에서는 세포 사멸 없이 완전한 G1기 정지를 유도합니다. 0.5 μM 농도의 이 화합물 처리는 인산화된 Akt 및 GSK-3β 수치를 현저히 감소시킬 뿐만 아니라, cyclin D1 단백질 발현도 감소시킵니다. 또한 FKHRL1, FKHR, TSC-2, mTOR, p70S6K를 포함하여 세포 증식 조절에 관여하는 다른 하위 신호 전달 성분의 인산화를 용량 의존적으로 억제합니다. 이 화학 물질은 0.1 μM 농도에서 mTOR를 억제하지 않으며, 100 μM의 고농도에서도 mTOR 활성을 40% 미만으로 억제합니다. 이 화합물은 인간 제대 정맥 내피 세포(HUVEC)에서 VEGF에 의해 유도되는 세포 이동 및 튜브 형성을 차단하고, RXF-631L 세포에서 HIF-1α의 발현과 VEGF 분비를 억제하여 강력한 체외 항혈관신생 활성을 나타냅니다. 이 화합물 처리는 콘카나발린 A로 활성화된 T 세포에서 IFNγ 및 IL-17의 생성을 억제하고, 섬유아세포 유사 활막 세포(FLS)의 증식 및 PGE(2) 생성을 억제합니다. |
| 키나아제 분석 |
PI3K 활성 억제
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A549 세포를 20 mM Tris-HCl(pH 7.5), 150 mM NaCl, 5 mM EDTA 및 1% Igepal CA-630을 포함하는 완충액에서 용해하고, 용해물을 20,000 g 및 4 °C에서 10분간 원심분리한 후 상층액을 세포 용해물(단백질 = 2-4 mg/mL)로 사용합니다. PI3K를 면역침전시키기 위해 200 μL의 세포 용해물을 anti-p85 다클론 항체 및 protein G-agarose(5 μL)와 함께 배양합니다. PI3Kα, PI3Kβ 및 PI3Kδ는 anti-p85 다클론 항체에 의해 면역침전될 수 있습니다. 면역침전물을 포함하는 아가로스 비드는 완충액 A(20 mM Tris-HCl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 5 mM EDTA 및 1% Igepal CA-630)로 2회, 완충액 B(500 mM LiCl 및 100 mM Tris-HCl, pH 7.5)로 1회, 증류수로 1회, 완충액 C(100 mM NaCl 및 20 mM Tris-HCl, pH 7.5)로 1회 세척합니다. 면역침전물을 200 μg/mL의 포스파티딜이노시톨을 포함하는 20 μL의 완충액 C에 현탁합니다. 이 혼합물을 25 °C에서 5분간 이 화합물의 농도를 높여가며 사전 배양합니다. [γ-32P]ATP(분석 혼합물당 2 μCi; 최종 농도 20 μM)와 MgCl2(최종 농도 20 mM)를 첨가하여 반응을 시작합니다. 반응 혼합물을 25 °C에서 20분간 배양합니다. 포스파티딜이노시톨의 인산화 산물을 박층 크로마토그래피로 분리하고 방사선 자기기록법으로 시각화합니다. 포스파티딜이노시톨-3-인산 영역을 플레이트에서 긁어내고 액체 섬광 분광법으로 방사능을 측정합니다. 이 화학 물질에 대한 억제 수준은 이 화합물 없이 얻은 32P 분당 계수(cpm)의 백분율로 결정합니다.
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| 생체 내(In vivo) |
ZSTK474를 경구 투여하면 피하 이식된 마우스 B16F10 흑색종 종양의 성장이 용량 의존적으로 억제되며, 100, 200, 400 mg/kg 용량에서 14일째에 각각 28.5%, 7.1%, 4.9%의 종양 퇴축이 나타나, 4가지 주요 항암제의 최대 내약 용량 투여 시 나타나는 종양 퇴축률인 96%, 35.7%, 24%, 68.3%보다 우수한 효과를 보입니다. 이 화합물을 400 mg/kg 용량으로 투여하면 마우스의 A549, PC-3 및 WiDr 이종 이식편의 성장을 완전히 억제하며 A549 이종 이식 종양의 퇴축을 유도합니다. 이는 RXF-631L 이종 이식 모델에서 종양 성장을 유의미하게 억제하며, 치료받은 마우스의 미세혈관 수 감소와 상관관계가 있습니다. 이 화학 물질을 경구 투여하면 쥐의 보조제 유발 관절염(AIA) 진행이 개선됩니다.
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참조 |
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적용 분야 (Applications)
| 방법 | 바이오마커 | 이미지 | PMID |
|---|---|---|---|
| Western blot | p-PDK1 / p-GSK3β / p-AKT / AKT P-gp / MRP1 p-Rb / p27 / Cyclin D1 HIF-1α / HIF-1β |
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28388564 |
| Growth inhibition assay | Cell viability |
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