Home Protein Tyrosine Kinase EGFR inhibitor Pelitinib (EKB-569)

연구용

Pelitinib (EKB-569) EGFR inhibitor

제품 번호: S1392

Pelitinib (EKB-569) is a potent irreversible EGFR inhibitor with IC50 of 38.5 nM. This compound also slightly inhibits Src, MEK/ERK and ErbB2 with IC50s of 282 nM, 800 nM and 1255 nM, respectively. Phase2.
Pelitinib (EKB-569) EGFR inhibitor Chemical Structure

화학 구조

분자량: 467.92

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품질 관리 (Quality Control)

배치: 순도: 99.49%
99.49

세포 배양, 처리 및 작업 농도
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

세포주 분석 유형 농도 배양 시간 제형 활성 설명 PMID
A431 Function assay Inhibition of EGFR autophosphorylation in human A431 cells, IC50=0.00802μM. 20797871
Sf9 Function assay 10 mins Inhibition of recombinant human His6-tagged EGFR cytoplasmic domain (645 to 1186 residues) expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells assessed as reduction in autophosphorylation preincubated for 10 mins followed by ATP-MgCl2 addition and measured, IC50=0.0385μM. 30600149
A431 Function assay 90 mins Inhibition of EGFR in human A431 cells assessed as reduction in EGF-stimulated EGFR autophosphorylation preincuabted for 90 mins followed by EGF-stimulation by sandwich-ELISA, IC50=0.039μM. 30973735
DiFi Function assay 2 hrs Inhibition autophosphorylation of EGFR in human DiFi cells after 2 hrs by ELISA, IC50=0.07943μM. 17689836
UCH1 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human UCH1 cells measured after 72 hrs by alamar blue assay, IC50=0.09μM. 30973735
UCH2 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human UCH2 cells measured after 72 hrs by alamar blue assay, IC50=1.6μM. 30973735
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화학 정보, 보관 및 안정성 (Chemical Information, Storage & Stability)

분자량 467.92 화학식

C24H23ClFN5O2

 보관 (수령일로부터)
CAS 번호 257933-82-7 SDF 다운로드 원액 보관

동의어 N/A Smiles CCOC1=C(C=C2C(=C1)N=CC(=C2NC3=CC(=C(C=C3)F)Cl)C#N)NC(=O)C=CCN(C)C

용해도 (Solubility)

In vitro
배치:

DMSO : 13 mg/mL (27.78 mM)
(수분으로 오염된 DMSO는 용해도를 감소시킬 수 있습니다. 신선하고 무수 DMSO를 사용하십시오.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

몰농도 계산기

질량 농도 부피 분자량
희석 계산기 분자량 계산기

In vivo
배치:

생체 내 제형 계산기 (투명한 용액)

1단계: 아래 정보 입력 (권장: 실험 중 손실을 고려하여 추가 동물 포함)

mg/kg g μL

2단계: 생체 내 제형 입력 (이것은 계산기일 뿐 제형이 아닙니다. 용해도 섹션에 생체 내 제형이 없는 경우 먼저 당사에 문의하십시오.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

계산 결과:

작업 농도: mg/ml;

DMSO 원액 준비 방법: mg 약물 사전 용해 μL DMSO ( 원액 농도 mg/mL, 농도가 해당 약물 배치의 DMSO 용해도를 초과하는 경우 먼저 당사에 문의하십시오. )

생체 내 제형 준비 방법: 취하다 μL DMSO 원액, 다음 추가μL PEG300, 혼합하고 투명하게 한 다음 추가μL Tween 80, 혼합하고 투명하게 한 다음 추가 μL ddH2O, 혼합하고 투명하게 합니다.

생체 내 제형 준비 방법: 취하다 μL DMSO 원액, 다음 추가 μL 옥수수 기름, 혼합하고 투명하게 합니다.

참고: 1. 다음 용매를 추가하기 전에 액체가 투명한지 확인하십시오.
2. 용매를 순서대로 추가해야 합니다. 다음 용매를 추가하기 전에 이전 추가에서 얻은 용액이 투명한 용액인지 확인해야 합니다. 와동, 초음파 또는 뜨거운 물 중탕과 같은 물리적 방법을 사용하여 용해를 도울 수 있습니다.

작용 메커니즘 (Mechanism of Action)

특징
An improved version of EKI-785.
Targets/IC50/Ki
EGFR
38.5 nM
Src
282 nM
MEK/ERK
800 nM
ErbB2
1.255 μM
Raf
3.353 μM
시험관 내(In vitro)
Pelitinib (EKB-569)은 밀접하게 관련된 c-erbB-2 및 Src, Cdk4, c-Met, Raf, MEK/ERK와 같은 다른 키나아제와 비교하여 EGFR에 대해 훨씬 더 높은 억제 활성을 나타내며, IC50 범위는 Src의 282 nM에서 Cdk4의 >20 μM까지입니다. 일관되게, 이 화합물 처리는 A431 세포에서 EGFR의 자가인산화는 유의하게 억제하지만 c-Met은 억제하지 않습니다. 이 화합물은 정상 인간 각질형성세포(NHEK)와 A431 및 MDA-468 종양 세포의 증식을 각각 IC50 61 nM, 125 nM, 260 nM으로 강력하게 억제하는 반면, MCF-7 세포에 대해서는 IC50 3.6 μM으로 거의 활성을 나타내지 않습니다. 이 화학 물질은 A431 및 NHEK 세포에서 EGF 유도 EGFR 인산화를 IC50 20-80 nM으로, STAT3 인산화를 IC50 30-70 nM으로 억제합니다. 또한 75-500 nM 농도에서 NF-κB 경로에 영향을 주지 않으면서 AKT 및 ERK1/2의 활성화를 구체적으로 억제합니다. NHEK 세포에서 이 화합물은 TGF-α 매개 EGFR 활성화를 IC50 56 nM으로, STAT3 및 ERK1/2 활성화를 각각 IC50 60 nM 및 62 nM으로 강력하게 억제합니다.
키나아제 분석
세포 내 EGFR의 자가인산화
배양 세포를 사용하는 실험의 경우, A431 세포를 다양한 농도의 Pelitinib (EKB-569)로 2.75시간 동안 처리한 후 100 ng/mL EGF와 0.25시간 동안 공동 배양합니다. 세포를 차가운 인산염 완충 식염수(PBS)로 두 번 세척한 후, 얼음 위에서 20분 동안 용해 완충액(10 mM Tris, pH 7.5, 5 mM ethylenediamine tetra-acetic acid (EDTA), 150 mM NaCl, 1% Triton X-100, 1% Sodium deoxycholate, 0.1% SDS, 1 mM PMSF, 10 mg/mL pepstatin A, 10 mg/mL leupeptin, 20 KIU/mL aprotinin, 2 mM sodium orthovanadate 및 100 mM sodium fluoride)에 첨가하여 면역침강 및 SDS-PAGE-면역블롯팅을 수행합니다. 면역침강을 위해 배양된 세포를 차가운 용해 완충액에 넣고 얼음 위에서 폴리트론(polytron)을 사용하여 즉시 여러 번 펄스를 주어 균질화합니다. 균질액을 먼저 2500 rpm(4 °C, 20분)에서 원심분리한 다음, 마이크로 원심분리기에서 14,000 rpm(4 °C, 10분)으로 다시 원심분리합니다. 상층액(단백질 1000 μg)을 15 mL의 EGFR 다클론 항체와 함께 4 °C에서 2시간 동안 배양합니다. 2시간 후, 50 μL의 protein G plus/protein A 아가로오스 비드를 첨가하고 4 °C에서 2시간 동안 지속적으로 회전시키며 배양합니다. 용해 완충액으로 세척한 후, 비드를 Laemmli 샘플 완충액에서 2분 동안 끓입니다. 그 후 단백질을 SDS-PAGE로 분리하고, immobilon 멤브레인으로 옮긴 뒤, 서양고추냉이 과산화효소(HRP)가 결합된 항-인산티로신 항체로 밤새 프로빙합니다. 멤브레인은 ECL 시약을 사용하여 현상합니다. 총 EGFR 단백질은 멤브레인을 스트리핑하고 수용체 특이적 항체로 재프로빙하여 결정합니다. 밴드의 정량화는 Molecular Dynamics 레이저 투과 스캐너와 ImageQuant 소프트웨어를 사용하여 덴시토메트리(densitometry)로 수행합니다.
생체 내(In vivo)
10 mg/kg Pelitinib (EKB-569)을 1회 경구 투여하면 EGFR이 과발현된 A431 이종이식 모델에서 1시간 이내에 90%, 24시간 후에는 50% 이상 EGFR 인산화를 강력하게 억제합니다. 이 화합물을 20 mg/kg/일의 용량으로 투여하면 APCMin/+ 마우스에서 종양 형성이 87% 억제되는데, 이는 EKI-785 2배 용량(40 mg/kg/일)을 사용했을 때와 동일한 효과로, 더 높은 생체 내 효능과 일치합니다. 이 화학 물질은 생체 내 기도 상피 세포에서 EGFR 신호 전달을 선택적으로 억제합니다. 바이러스 감염에 의해 유도되고 술잔 세포 화생으로의 지연되지만 영구적인 전환을 특징으로 하는 기도 상피 리모델링 마우스 모델에서, 이 화합물을 20 mg/kg/일로 처리하면 섬모 세포의 증가와 클라라 세포의 감소를 완전히 차단하고 술잔 세포의 화생을 유의하게 억제함으로써 상피 리모델링의 3가지 측면을 모두 교정합니다.
참조