Home Protein Tyrosine Kinase EGFR 억제제 Dacomitinib (PF-299804)

연구용

Dacomitinib (PF-299804) HER 억제제

제품 번호: S2727

Dacomitinib (PF-299804)은 강력하고 비가역적인 pan-ErbB 억제제이며, 무세포 분석에서 6 nM의 IC50으로 주로 EGFR에 작용합니다. Dacomitinib은 각각 45.7 nM 및 73.7 nM의 IC50으로 ERBB2 및 ERBB4를 억제합니다. Dacomitinib은 EGFR 또는 ERBB2 돌연변이가 있는 NSCLC와 EGFR T790M 돌연변이를 보유한 NSCLC에 효과적입니다. Dacomitinib은 세포 성장을 억제하고 Apoptosis related를 유도합니다. 임상 2상.
Dacomitinib (PF-299804) EGFR 억제제 Chemical Structure

화학 구조

분자량: 469.94

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품질 관리 (Quality Control)

배치: 순도: 99.84%
99.84

세포 배양, 처리 및 작업 농도
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

세포주 분석 유형 농도 배양 시간 제형 활성 설명 PMID
PC9 cells Function assay 2 h Inhibition of EGFR exon 19 deletion activating mutant phosphorylation in human PC9 cells after 2 hrs by fluorescence assay, IC50=0.63 nM 23930994
human LoVo cells Function assay 2 h Inhibition of wild type EGFR phosphorylation in human LoVo cells after 2 hrs by fluorescence assay, IC50=0.011 μM 23930994
human NCI-H1975 cells Function assay 2 h Inhibition of EGFR L858R/T970M double mutant phosphorylation in human NCI-H1975 cells after 2 hrs by fluorescence assay, IC50=0.042 μM 23930994
human NCI-H1975 cells Proliferation assay Antiproliferative activity against human NCI-H1975 cells assessed as growth inhibition, GI50=0.1233 μM 26310890
Sf9 Function assay 6 mins Irreversible inhibition of GST-tagged ERBB1 (unknown origin) (Met-668 to Ala-1211 residues) expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells assessed as reduction in Glu/Tyr copolymer phosphorylation after 6 mins by ELISA, IC50 = 0.006 μM. 27491023
NIH/3T3 Function assay 2 hrs Irreversible inhibition of full length human ERBB1 autophosphorylation transfected in EGF-stimulated mouse NIH/3T3 cells incubated for 2 hrs followed by stimulation with EGF for 10 mins, IC50 = 0.006 μM. 27491023
Sf9 Function assay 6 mins Irreversible inhibition of GST-tagged ERBB2 (unknown origin) (Ile-675 to Val-1256 residues) expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells assessed as reduction in Glu/Tyr copolymer phosphorylation after 6 mins by ELISA, IC50 = 0.046 μM. 27491023
Sf9 Function assay 6 mins Irreversible inhibition of GST-tagged ERBB4 (unknown origin) (Gly-259 to Gly-690 residues) expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells assessed as reduction in Glu/Tyr copolymer phosphorylation after 6 mins by ELISA, IC50 = 0.074 μM. 27491023
Sf9 Function assay 30 mins Irreversible inhibition of human recombinant GST-tagged JAK3 expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells assessed as reduction in polyglutamic acid-tyrosine phosphorylation after 30 mins by ELISA, IC50 = 3.57 μM. 27491023
NIH/3T3 Function assay 30 mg/kg 2 days In vivo inhibition of full length human ERBB1 autophosphorylation transfected in NIH/3T3 cells implanted in mouse at 30 mg/kg, po qd for 2 days measured 24 hrs post last dose by Western blot analysis 27491023
insect cells Function assay Inhibition of GST-tagged human EGFR catalytic domain expressed in insect cells, IC50 = 0.006 μM. 28754471
NCI-H1819 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human NCI-H1819 cells expressing wild type HER2 incubated for 72 hrs by MTS assay, IC50 = 0.029 μM. 28754471
insect cells Function assay Inhibition of GST-tagged human HER2 catalytic domain expressed in insect cells, IC50 = 0.0457 μM. 28754471
NCI-H1975 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human NCI-H1975 cells expressing EGFR T790M/L858R mutant incubated for 72 hrs by MTS assay, IC50 = 0.44 μM. 28754471
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화학 정보, 보관 및 안정성 (Chemical Information, Storage & Stability)

분자량 469.94 화학식

C24H25ClFN5O2

 보관 (수령일로부터)
CAS 번호 1110813-31-4 SDF 다운로드 원액 보관

동의어 PF299804,PF299 Smiles COC1=C(C=C2C(=C1)N=CN=C2NC3=CC(=C(C=C3)F)Cl)NC(=O)C=CCN4CCCCC4

용해도 (Solubility)

In vitro
배치:

DMSO : 49 mg/mL (104.26 mM)
(수분으로 오염된 DMSO는 용해도를 감소시킬 수 있습니다. 신선하고 무수 DMSO를 사용하십시오.)

Ethanol : 15 mg/mL

Water : Insoluble

몰농도 계산기

질량 농도 부피 분자량
희석 계산기 분자량 계산기

In vivo
배치:

생체 내 제형 계산기 (투명한 용액)

1단계: 아래 정보 입력 (권장: 실험 중 손실을 고려하여 추가 동물 포함)

mg/kg g μL

2단계: 생체 내 제형 입력 (이것은 계산기일 뿐 제형이 아닙니다. 용해도 섹션에 생체 내 제형이 없는 경우 먼저 당사에 문의하십시오.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

계산 결과:

작업 농도: mg/ml;

DMSO 원액 준비 방법: mg 약물 사전 용해 μL DMSO ( 원액 농도 mg/mL, 농도가 해당 약물 배치의 DMSO 용해도를 초과하는 경우 먼저 당사에 문의하십시오. )

생체 내 제형 준비 방법: 취하다 μL DMSO 원액, 다음 추가μL PEG300, 혼합하고 투명하게 한 다음 추가μL Tween 80, 혼합하고 투명하게 한 다음 추가 μL ddH2O, 혼합하고 투명하게 합니다.

생체 내 제형 준비 방법: 취하다 μL DMSO 원액, 다음 추가 μL 옥수수 기름, 혼합하고 투명하게 합니다.

참고: 1. 다음 용매를 추가하기 전에 액체가 투명한지 확인하십시오.
2. 용매를 순서대로 추가해야 합니다. 다음 용매를 추가하기 전에 이전 추가에서 얻은 용액이 투명한 용액인지 확인해야 합니다. 와동, 초음파 또는 뜨거운 물 중탕과 같은 물리적 방법을 사용하여 용해를 도울 수 있습니다.

작용 메커니즘 (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
EGFR
(Cell-free assay)
6.0 nM
ErbB2
(Cell-free assay)
45.7 nM
ErbB4
(Cell-free assay)
73.7 nM
시험관 내(In vitro)

PF299804 is a specific inhibitor of the ERBB family of kinases. This compound inhibits EGFR signaling and induces apoptosis in the EGFR T790M-containing H3255 GR cell line. It is effective in -sensitive and NSCLC cell lines. This chemical inhibits the growth of H3255 and HCC827 cells engineered to express EGFR T790M. It inhibits EGFR phosphorylation in the presence of the T790M mutation. This agent is believed to irreversibly inhibit ERBB tyrosine kinase activity through binding at the ATP site and covalent modification of nucleophilic cysteine residues in the catalytic domains of ERBB family members. It shows significant growth-inhibitory effects in HER2-amplified gastric cancer cells (SNU216, N87), and it has lower 50% inhibitory concentration values compared with other EGFR tyrosine kinase inhibitors, including BIBW-2992, and CI-1033. This inhibitor induces apoptosis and G1 arrest and inhibits phosphorylation of receptors in the HER family and downstream signaling pathways including STAT3, AKT, and extracellular signal-regulated kinases (ERK) in HER2-amplified gastric cancer cells. It also blocks EGFR/HER2, HER2/HER3, and HER3/HER4 heterodimer formation as well as the association of HER3 with p85α in SNU216 cells. A recent research uses forty-seven human breast cancer and immortalized breast epithelial lines to evaluate the inhibition effects of this compound, the results indicate it preferentially inhibits growth of HER-2-amplified breast cancer cell lines than nonamplified lines (RR = 3.39, p < 0.0001). This chemical reduces the phosphorylation of HER2, EGFR, HER4, AKT, and ERK in the majority of sensitive lines. It exerts its anti-proliferative effect through a combined G0/G1 arrest and an induction of apoptosis.

키나아제 분석
ELISA 기반 ERBB 키나아제 분석
ERBB1, ERBB 2 및 ERBB4 세포질 융합 단백질은 PCR을 사용하여 ERBB1 서열(Met-668 ~ Ala-1211), ERBB2 서열(Ile-675 ~ Val-1256) 및 ERBB4 서열(Gly-259 ~ Gly-690)을 바큘로바이러스 벡터 pFastBac에 클로닝하여 생성됩니다. 단백질은 바큘로바이러스에 감염된 Sf9 곤충 세포에서 GST 융합 단백질로 발현됩니다. 단백질은 글루타치온 세파로오스 비드를 사용하는 친화성 크로마토그래피로 정제됩니다. ERBB 티로신 키나아제 활성의 억제는 ELISA 기반 수용체 티로신 키나아제 분석을 사용하여 평가됩니다. 키나아제 반응(50 mM HEPES, pH 7.4, 125 mM NaCl, 10 mM MgCl2, 100 μM 소듐 오르토바나데이트, 2 mM 디티오트레이톨, 20 μM ATP, 이 화합물 또는 비히클 대조군, 및 반응 혼합물 50 μL당 1-5 nM GST-erbB)은 0.25 mg/mL 폴리-Glu-Tyr로 코팅된 96-웰 플레이트에서 실행됩니다. 반응물은 실온에서 흔들면서 6분 동안 인큐베이션됩니다. 키나아제 반응은 반응 혼합물을 제거하여 중지한 다음, 웰을 세척 버퍼(PBS 내 0.1% Tween 20)로 세척합니다. 인산화된 티로신 잔기는 3% BSA 및 0.05% Tween 20을 포함하는 PBS에 희석된 0.2 μg/mL 항포스포티로신 항체(Oncogene Ab-4; 50 μL/웰)를 서양고추냉이 퍼옥시다아제(HRP)에 결합시켜 첨가하고 실온에서 흔들면서 25분 동안 감지합니다. 항체를 제거하고 플레이트를 세척 버퍼로 세척합니다. HRP 기질(SureBlue3,3,5,5-테트라메틸 벤지딘 또는 TMB)을 첨가하고(웰당 50 μL) 실온에서 흔들면서 10-20분 동안 인큐베이션합니다. TMB 반응은 50 μL 정지 용액(0.09 N H2SO4)을 첨가하여 중지합니다. 신호는 450 nm에서 흡광도를 측정하여 정량화합니다. 이 화합물에 대한 IC50 값은 중간 효과 방법을 사용하여 결정합니다.
생체 내(In vivo)

Orally administered PF299804 effectively inhibits growth of HCC827 Del/T790M xenografts. Low oral administration of this compound (15mg/kg) causes significant antitumor activity, including marked tumor regressions in a variety of human tumor xenograft models that express and/ or overexpress ERBB family members or contain the double mutation (L858R/T790M) in ERBB1 (EGFR).

참조
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22761403/

적용 분야 (Applications)

방법 바이오마커 이미지 PMID
Western blot pEGFR / EGFR / pERK / ERK / pAKT / AKT / p-mTOR / mTOR / pSTAT3 / STAT3
S2727-WB1
24853121
Immunofluorescence LC3
S2727-IF1
28366635
Growth inhibition assay Cell viability
S2727-viability1
28363995

임상시험 정보 (Clinical Trial Information)

(데이터 출처 https://clinicaltrials.gov, 업데이트 날짜 2024-05-22)

NCT 번호 모집 조건 스폰서/협력자 시작일 단계
NCT06075615 Not yet recruiting
Carcinoma Non-Small-Cell Lung
Pfizer
 September 1 2024 --
NCT06321510 Not yet recruiting
Lung Cancer
Pfizer
 April 1 2024 --
NCT04609319 Active not recruiting
Lung Cancer
Pfizer
 January 23 2021 --
NCT03865446 Completed
Severe Hepatic Impairment
Pfizer
 April 5 2019 Phase 1
NCT02382796 Completed
NSCLC
Pfizer
 July 10 2015 Phase 2
NCT02268747 Unknown status
Skin Squamous Cell Cancer
Fondazione IRCCS Istituto Nazionale dei Tumori Milano
 November 2014 Phase 2

자주 묻는 질문 (Frequently Asked Questions)

질문 1:
I would like to know whether the in vivo formulation you recommend for it is suitable for oral administration?

답변:
S2727 in 1% DMSO+30% polyethylene glycol+1% Tween 80 at 10mg/ml is a homogeneous suspension, and it was fine for oral gavage. When preparing the solution, please dissolve it in DMSO clearly first. If it dissolves not readily, please sonicate and warm it at about 45-50℃ for a while to help dissolving. Then add PEG 300 and Tween 80. After they mixed well, dilute with water. Then it will become a homogeneous suspension.